无血清细胞冻存液（无 DMSO）

1、不含 DMSO,不含血清及动物源成分 ，化学组成明确 ，避免外源因子污染（如病毒、支原体）。

2、含保护性成分 ，减少冷冻损伤 ，提高细胞存活率（复苏活率>98%）。

3、 DMSO 对细胞有毒副左右 ，在复苏和冻存该过程中 ，对细胞都有影响 ，我公司该产品 ，不含 DMSO ，于 DMSO 敏感细胞 ，有较好效果。

保存说明：

保存 ：4℃保存 ，一年有效；运输 ：冰袋（2-8℃)  或蓝冰运输。

操作便捷性：

1.  无需程序降温 ：可直接将冻存管置于-80℃冰箱冷冻 ，省去传统梯度降温步骤。

2.  即用型配方 ：无需额外配制 ，简化实验流程。

3.  保存稳定性。

4.  冻存细胞可在-80℃保存 1-2 年 ，长期保存建议转移至液氮（ >5 年）。

5.  冻存液本身在 2-8℃ 保存 12 个月。

操作步骤：

细胞冻存：

1、选择对数生长期、状态良好的细胞 ，确保无污染。

2、贴壁细胞 ：消化成单细胞悬液（推荐含 EDTA 的胰酶）。

3、悬浮细胞 ：直接离心（300g ， 5-10 分钟）弃上清。

4、重悬与分装:

1) 用预冷的冻存液重悬细胞 ，调整浓度为 1 × 10⁶ ~1 × 10⁷/mL（推荐密度： 2-5× 10⁶/mL）。

2) 分装至冻存管（每管 1-1.5mL） ，避免室温停留超过 10 分钟。

5、冷冻保存:

1) 直接转移冻存管至-80℃冰箱 ，无需程序降温盒。

2) 长期保存： 24 小时后转入液氮罐（气相液氮更佳）。

细胞复苏：

1、从液氮或-80℃取出冻存管 ， 37℃水浴轻摇至仅剩微小冰块 ，加一点完全培养基。

2、稀释与离心:

1) 将细胞悬液转移至含预温培养基（体积为冻存液 9 倍） 的离心管 ，轻柔混匀。

2)离心（300g ， 5 分钟）弃上清 ，去除残留 DMSO。

3、接种培养 ：用新鲜培养基重悬细胞 ，接种至培养容器 ，24 小时后更换正常培养基。
注意事项：

1、细胞状态 ：冻存前确认细胞无污染且处于增殖旺盛期 ，避免使用衰老或过密细胞 ，*好是 1 天能传代一 次。

2、操作时效性 ：冻存液与细胞混合后需迅速分装冷冻 ，避免长时间暴露于室温或 4℃。

3、安全防护 ：操作时需穿戴实验服及手套 ，避免直接接触皮肤。

4、保存条件 ：冻存液开封后建议分装 ，避免反复冻融；长期存放需严格密封。

5、适用性验证：首次使用特定细胞类型时 ，建议测试冻存效果（如保存时间、复苏活率）。

6、本产品仅限于专业人员的科学研究用 ，不得用于临床诊断或治疗 ，不得用于食品或药品 ，不得存放于普通 住宅内。

7、为了您的安全和健康 ，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司