外切核酸酶 III （Exonuclease III ）

产品说明

外切核酸酶 III 作用于双链 DNA ，从 3 ' OH  末端方向逐步切去单核苷酸。每次酶与底物结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在 DNA  分子群内产生渐进式 3’端缺失。

尽管可以作用于双链 DNA  的切刻产生单链缺口，但该酶*适底物是平齐末端或 3 '  凹陷末端 DNA 。由于对单链 DNA  无活性，因此该酶无法切割 3 '  突出末端。3 ' →5 '  外切酶活性对底物的切割程度随 3 '  突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端完全不能被切割。

核酸外切酶 III  的活性部分依赖 DNA 双螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞ G）。温度、盐浓度和酶与 DNA 的比例对酶活性影响很大，应根据不同的反应调整反应条件。

核酸外切酶 III  也有 RNase H、3 ' -磷酸酶、脱嘌呤/嘧啶（AP）位点特异性核酸内切酶活性。本公司Exonuclease III 是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1 活性单位指在 37℃条件下， 30 min  内催化生成 1nmol 酸可溶性总核苷酸所需的酶量。

活性测定条件

1×AM BufferA: 10 mM Bis-Tris ，10 mM MgCl2 ，1 mM DTT（pH 7.0）浓度：100U/μl

保存条件：-20℃可保存 2 年，避免反复冻融特点与适用范围

     3 ' →5 '  外切酶活性

  双链 DNA 的非定向巢式缺失

     RPA 扩增中荧光探针的降解，释放荧光信号

  制备用于双脱氧测序的单链模板

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有*高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

200 mM KCl ，5 mM KPO4 ，5 mM β-ME ，0.05 mM EDTA ，200 µg/ml BSA ，50% Glycerol (pH

6.5@25℃)。

注意事项

l 核酸外切酶 III  不能切割硫代磷酸酯键。因此，也可以通过引入一个 α-硫代磷酸核苷酸将 DNA  分子的一端保护起来， 以进行单向切割。

l 这种特性可以用于对一端为钝化末端（3'  突出端），另一端是敏感末端（平端或 5 '  突出端）的线性 DNA  分子进行单方向切割。

l 在如下 Buffer 中的活性为：AM Buffer 1 ：100%，AM Buffer 2 ：75%，AM Buffer 3 ：25%， AM Buffer 4 ：75% ，AM Buffer 4. 1 ：100%

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