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细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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Y1HGold Chemically Competent Cell

产品货号：CC96402

产品规格：10 ×100ul/100×100ul

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标签：感受态

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产品简介

Y1HGold 菌株是 Clontech 公司开发的 GAL4-AbA 酵母单杂系统用菌株，MATα 型，可直接转化质

粒进行筛库试验。Transformation marker 为：ura3，leu2；报告基因为：AbAr。Y1HGold-GAL4-

AbA 酵母单杂系统需要两种质粒配套使用：pAbAi 和 pGADT7。质粒 pAbAi 的筛选标志为 URA，

用于表达 pBait-AbAi construct (1~3 个 bait DNA 序列重复串联后克隆到 pAbAi 中)；质粒 pGADT7

的筛选标志为 LEU，用于表达 AD(GAL4 C 端 768 ~ 881 位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。

GAL4-AbA 酵母单杂系统原理：Aureobasidin A (AbA)是一种环酯肽抗生素，在低浓度 (0.1-0.2

µg/ml)下即可对酵母产生毒性。基因组中整合了 pBait-AbAi 的酵母菌株 (Bait-Reporter Yeast Strains)，

当猎物蛋白 (Prey)结合到诱饵序列 (Bait DNA)上，GAL4 AD 就会激活 AbAr 的表达，从而能够在含

有抗生素 AbA 的培养基上生长。AbAr 与营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，可以降低酵

母单杂假阳性发生的概率。Y1HGold 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7

质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

产品组分

名称

规格

储存方式

Y1HGold Competent Cell

100 μl /支

-80℃（3 个月）

pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)

10 μl

-80℃（12 个月）

Carrier DNA (10 μg/μl)

100 μl

-20℃（12 个月）

PEG/LiAC

5 ml

4℃（12 个月）

基因型： MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

使用方法：

● 操作方法

1. 取 100 µl 冰上融化的 Y1HGold 感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒 2-5 µg，Carrier DNA(95-

100℃， 5min，快速冰浴，重复一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl 并吸打几次混匀，30℃水浴 30 min

(15 min 时翻转 6-8 次混匀)。

2. 42℃水浴 15 min (7.5 min 时翻转 6 - 8 次混匀)。

3. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30 s 弃上清。

4. ddH2O 50 µl 重悬，涂板，29℃培养 48 - 96 h。

● 培养基配制

① YPDA (1L): Tryptone 20 g ，Yeast extract 10 g ，0.2% adenine 15 ml 补水到 950 ml，用盐酸调

pH 到 6.5； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高压灭菌；待培养基温度降到 55℃时，加入

已过滤的 40% 葡萄糖 50 ml。

② SD medium (1L): Yeast Nitrogen base 6.7 g ，葡萄糖 20 g ，Dropout 适量（按说明书）补水到 1L，

调 pH 至 5.8； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高压灭菌。

③ 0.2% adenine (1L): Adenine 2 g,，补水到 1L；溶解后高压灭菌或 0.22 µm 滤膜过滤除菌。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化 2 - 3 种质粒时可增加质粒的用量。

4. Y1HGold 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为 27 - 30℃；高于 31℃，生长速度和转化效率呈

指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的

Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的

ADE2 基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中间产

物 P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂

板为例：涂 YPDA 平板 29℃，48 h 培养可见直径 1 mm 克隆；涂 SD 单缺平板 29℃，48 - 60 h 培养

可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 双缺平板 29℃，60 - 80 h 培养可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺

平板平板 29℃，80 - 90h 培养可见直径 1 mm 克隆

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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