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产品分类：

细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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K599感受态（电转）

产品货号：EC96315

产品规格：10 ×50ul/100×50ul

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标签：感受态

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产品简介

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够

感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599 发根农杆菌（NCPPB2659）含

有 pRi2659 农杆碱型 Ri 质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素

抗性。本公司生产的 K599 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301

质粒（卡那霉素

抗性）检测，转化效率>105 cfu/μg DNA。

产品组成

组分

K599

电转感受态细胞

10 ×50 μL

100 ×50μL

定制

基因型：Agrobacterium rhizogenes (StrR ) pRi2659 (agropine type)

存储条件

-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除农杆碱型 Ri 质粒 pRi2659 外，无外源质粒 DNA 残留

电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工

作台中将其倒置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，然后插入冰中预冷；

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 质粒 DNA（体积不大于 5μl），用

200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖；

3. 开启电转仪，设置参数（2500V ，200Ω，25μF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插

入冰中，加入 900μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。

（注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作）

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平

板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；

2. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量；

3. 平板上阳性克隆密度不宜过大，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量；

4. K599 具有链霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性质粒的转化

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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