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细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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Ar A4感受态（电转）

产品货号：EC96311

产品规格：10 ×50ul/100×50ul

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标签：感受态

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产品简介

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够

感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4 发根农杆菌菌株含有农杆碱型

Ri 质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。本公

司生产的 Ar.A4 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2 质粒（壮观霉素抗性）检测，转

化效率>105 cfu/μg DNA。

产品组成

组分

Ar.A4

电转感受态细胞

10 ×100 μL

100 ×100μL

定制

基因型：Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)

存储条件

-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留

电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使

乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰

中静置 5 分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中 5分钟，待其融化，加入 0.01-1 μg质粒 DNA（体积不大于 6ul），

用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，

空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为 Biorad 推荐，使用者也可按

所用电转仪推荐的 protocol 操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入 900 μl

无抗生素的 LB 并转移到感受态空管中，28℃振荡培养 2~3 小时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB

平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml kan 时，28℃培养 48 h 即可；平板中

同时加入 50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 则需要 28℃

培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25ug/ul，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4. Ar.A4 具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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