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产品分类：

细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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GV3101感受态（电转）

产品货号：EC96304

产品规格：10 ×50ul/100×50ul

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标签：感受态

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产品简介

GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因Rif，为了便于转化操作，

此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因

(vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移

功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含

有筛选标签：Gent，赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米等植物的转基因

操作。本公司开发的 GV3101 电转感受态特别适用于大质粒的转化：经 pCAMBIA2301 质粒

(size:11633 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

产品组成

组分

GV3101

电转感受态细胞

10 × 50μL

100 × 50μL

定制

基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 外，无外源质粒 DNA 残留；

电转法转化效率≥105cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工

作台中将其倒置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，然后插入冰中预冷；

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 质粒 DNA（体积不大于 5μl），用

200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖；

3. 开启电转仪，设置参数（2500 V ，200 Ω，25μF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插

入冰中，加入 900μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。

（注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作）

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平板

上，倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天（当平板只含有 50μg/ml Kan 时，28 ℃培养 48h 即可；平板中同时

加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 时，需 28 ℃培养 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 时，则需要 28 ℃

培养 72~90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25μg/μl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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