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产品分类：

细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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EHA105感受态

产品货号：CC96301

产品规格：10 ×100ul/100×100ul

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标签：感受态

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产品简介

EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而来，为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基

因 Rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105

(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，

pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T

DNA 顺利转移)。EHA105 菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的 EHA105 化

学转化感受态细胞经特殊工艺制作，经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率≥104 cfu/μg DNA。

产品组成

组分

化学感受态细胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥104 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液

氮冷冻 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80 ℃冰冻）、37 ℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时；

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB

平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml Kan 时，28℃培养 48h 即可；平板

中同时加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要

28℃培养 72-90 h）。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/μl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。

4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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