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产品分类：

细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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Rosetta-gamim B (DE3)pLacl 感受态

产品货号：CC96119

产品规格：10 ×100ul/100×100ul

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标签：感受态

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产品简介

Rosetta-gami B 系列菌株来源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列和 Origami

系列菌株的优点。菌株含有 pLacIRARE 质粒，能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA, AGG,

AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有密码子的 tRNA，提高了真核细胞蛋白在大肠杆菌中的表达水

平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株

能够更加高效地在细胞质内生成二硫键，有助于表达含二硫键的活性蛋白。菌株带有氯霉素、卡

那和四环素抗性，无法用于转化含这些抗性的质粒。Rosetta-gami B(DE3)系列菌株含有溶源的

λDE3，可以表达 T7 RNA 聚合酶，适用于 pET 系列载体及其他 T7 启动子系列载体。此外，

pLacIRARE 质粒能够额外表达 lac 转录抑制蛋白，从而抑制了 lac 启动子的本底表达水平。

pLacIRARE 质粒的起始复制位点是 p15 Origin, 这使得该质粒能够和 pUC-及 pBR322-衍生的质粒互

相共存。经 pUC18 质粒转化检测，Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA

以上。

产品组成

组分

Rosetta-gami B (DE3) pLacI

化学感受态细胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pLacIRARE (CamR, KanR, TetR)

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pLacIRARE 质粒外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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