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产品分类：

细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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Rosetta-gami 2 (DE3)pLacl 感受态

产品货号：CC96120

产品规格：10 ×100ul/100×100ul

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标签：感受态

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产品简介

Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的优点；Rosetta-gami 2

(DE3)系列菌株是来源于 Origami 2 系列菌株，在其染色体上带有溶源性的 λDE3，可表达 T7 RNA

聚合酶。由于该菌株不含卡纳抗性，适用于 pET 系列载体及其他 T7 启动子系列载体。该菌株携带

有 trxB 和 gor 基因突变，从而提高了含二硫键正确折叠蛋白的表达效率；同时带有的 pLacIRARE2

质粒（携带氯霉素抗性），除了能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA, AGG, AGA, CUA,

CCC, 和 GGA 六个稀有密码子的 tRNA 外，还提供了第七个稀有密码子 CGG 的 tRNA，因而能够增

强真核细胞蛋白在大肠杆菌中的表达水平。此外，LacI 蛋白也可以抑制 T7lac 启动子在无诱导剂时

的本底表达。经 pUC18 质粒转化检测，Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 感受态细胞的转化效率可达 107

cfu/μg DNA。

产品组成

组分

Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI

化学感受态细胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10

trxB pLacIRARE2 (CamR, StrR, TetR)

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pLacIRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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