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细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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Rosetta (DE3)pLysS 感受态

产品货号：CC96112

产品规格：10 ×100ul/100×100ul

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标签：感受态

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产品简介

Rosetta 系列菌株来源于 BL21 系列宿主菌，该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码

子，增加了真核细胞的蛋白表达水平。Rosetta(DE3)pLysS 来源于 Rosetta(DE3)，菌株能够提供

AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 稀有密码子的 tRNA。Rosetta(DE3)pLysS 载体通过提供稀有

密码子，使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌，能够提供更加“通用”的蛋白质表达，从而提升目的蛋

白表达水平。DE3 是溶源性的 λDE3, 所以带有 T7 RNA 聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于 pET 系

列载体，及其他 T7 启动子系列载体。含有 pLysSRARE2 质粒，能够产生 T7 溶菌酶，可以有效降低

目的基因的基础表达水平，该质粒具有氯霉素抗性。pLysSRARE2质粒的起始复制位点是p15 Origin,

这使得该质粒能够和 pUC-及 pBR322-衍生的质粒互相共存。经 pUC18 质粒转化检测，

Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA 以上。

产品组成

组分

Rosetta(DE3)pLysS

化学感受态细胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (CamR)

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除 pLysSRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90 s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入900 μL LB或SOC培养基（室温或37 ℃预热），然后置于37 ℃摇床复壮45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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