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细胞系/株原代细胞细胞培养液感受态智能冷链箱血液制品细胞培养耗材辅助试剂

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EPI300 感受态

产品货号：CC96163

产品规格：10 ×100ul/100×100ul

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标签：感受态

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产品简介

EPI300 细胞含有一个突变的 trfA 基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有 oriV 复制子的质粒的高拷

贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导 trfA 基因的表达。当含有 oriV 复制子质粒的 EPI300 细胞在 LB/2YT 或 SOB 培

养基中生长时，trfA 基因的表达被抑制，oriV 复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入

CopyMore 300 诱导剂时，oriV 复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此，

EPI300 菌株可以降低 oriV 复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr

hsdRMS-mcrBC]基因型使 EPI300 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA（例如：哺乳动物

基因组 DNA）。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacZΔM15 标

记的存在使 EPI300 可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗性。经 pUC18 质粒转化检测，EPI300 感受态

细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA。

产品组成

组分

EPI300

化学感受态细胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galK λ– rpsL nupG

trfA dhfr

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90 s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

EPI300 化学感受态

#CC961634. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。

原创作者：上海语纯生物科技有限公司

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